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          在试验中,挑选胃蛋白酶原elisa有些什么要求?
            在胃蛋白酶原elisa中,进行各项试验条件的挑选是很重要的,其间包括:
            (1) 固相载体的挑选:许多物质可作为固相载体,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。现在常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不论何种载体,在使用前均可进行筛选:用等量抗原包被,在同一试验条件下进行反响,调查其显色反响是否均一性,据此判明其吸附功能是否良好。
            (2) 包被抗体(或抗原)的挑选:将抗体(或抗原)吸附在固相载体外表时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间。吸附温度,时刻及其蛋白量也有一定影响,一般多选用4℃ 18~24小时。胃蛋白酶原elisa蛋白质包被的适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,在其它试验条件相同时,调查阳性标本的OD值。挑选OD值大而蛋白量较少的浓度。关于多数蛋白质来说通常为1~10μg/ml。
            (3) 酶符号抗体作业浓度的挑选:首先用直接ELISA试剂盒法进行初步效价的滴定(见酶符号抗体部份)。然后再固定其它条件或采取“方阵法”(包被物、待检样品的参阅品及酶符号抗体分别为不同的稀释度)在正式试验系统里地滴定其作业浓度。
            (4) 酶的底物及供氢体的挑选:对供氢体的挑选要求是价廉、安全、有明显地显色反响,而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用,应留意防护。胃蛋白酶原elisa有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体,如TMB和ABTS是现在较为满意的供氢体。底物作用一段时刻后,应参加强酸或强碱以终止反响。通常底物作用时刻,以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制,尤其是H2O2在临用前参加。
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